Меню

Диагностика вирусного лейкоза крупного рогатого скота

08.01.2017 - 4. Примеры применения
Диагностика вирусного лейкоза крупного рогатого скота

Сейчас важной мировой проблемой является экспрессный контроль распространения ретровирусной инфекции среди людей и животных. Как известно, ретровирусы являются возбудителями приобретенного иммунодефицита у людей; они являются также возбудителями вирусного лейкоза крупного рогатого скота. Усовершенствование методов диагностики, которые бы позволили выявить заболевание на начальных стадиях развития, — крайне важная и неотложная задача.

Разработано около 20 разных методов лабораторной диагностики лейкоза, каждый из которых имеет свои преимущества и недостатки. Поэтому одной из важных задач на сегодня является разработка новых чувствительных, но в то же время простых и быстрых методов для диагностики лейкоза на ранних этапах развития заболевания. Одним из таких альтернативных подходов есть создания и применения оптического иммунного сенсору, основанного на эффекте поверхностного плазмонного резонанса.

Действие сенсора основано на определении уровня индуктируемых вирусом лейкоза антител в сыворотке крови животных. Возможное диагностирование также не по крови, а по капле молока. Сенсор может обеспечить: 1) прямой анализ, без использования дополнительных реагентов; 2) экспрессный анализ, в течение 10 минут; 3) анализ без взятия крови, а используя каплю молока; 4) дешевый анализ, стоимостью менее 1 доллара США.

Для проверки разработанного биосенсора были использовано: антиген вируса лейкоза полученный от «Лейкопол» г. Полтава и сыворотки крови  коров полученных из разных хозяйств Киевской области, переданные нам Белоцерковским национальным аграрным университетом.

Поскольку для установления онковирусной инфекции у животных в Украине узаконена реакция имуннодиффузии (РИД), для проверки использовались РИД — позитивные и РИД — негативные сыворотки крови.  Установлено, что при исследовании РИД — позитивных сывороток ППР анализ позволяет регистрировать наличие антител в 10000-кратных разведениях сывороток, при этом фиксировали изменения угла в пределах 700-1000 угл. с., что значительно больше предельной чувствительности прибора. В пробах, которые определялись по результатам РИД как сомнительные, наличие специфических антител фиксировали лишь в 1000 — или 500-кратных разведениях. Наибольший разброс в результатах отмечался при исследовании РИД — негативных сывороток. В 500-кратном разведении РИД — негативные пробы от разных коров вызывали отклик сенсора в пределах 100-600 угл. с.watch full movie Logan online

Это связано с тем, что антитела присутствующие в таких сыворотках в количестве, которое лежит за пределами чувствительности РИД.

Также проводилась проверка возможности диагностирования лейкоза по молоку коров. В эксперименте исследовано 15 проб от РИД — позитивних и 10 проб от РИД — негативных коров. Установлено, что при исследовании проб молока от больных животных анализ с помощью «Плазмонов» позволяет регистрировать наличие антител при 80-кратных разведениях сыворотки и при этом удавалось фиксировать сдвиг угла в пределах  250 — 300 угл. с. Оптимальным для проведения такого анализа было разведение 1:20. При таком разведении контрольные пробы не вызывали изменения резонансного угла. Однако пробы молока от РИД — негативних коров вызывали отзыв в пределах  50 — 70  угл. с. Это связано с тем, что антитела присутствующие в таких сыворотках в количествах, что лежать за пределами чувствительности РИД.

Статистически обработанные результаты показаны на рис. 1

Рис. 1   Величины отклонения резонансного угла иммунного сенсора на основе ППР при исследовании сывороток крови и молока коров. 1, 2 — сыворотки крови в разведении 1:500 (РИД-позитивные и РИД-негативные соответственно); 3, 4 — сыворотки молока (в разведении 1:20) от РИД-позитивных (3) и РИД-негативних коров (4).

Таким образом, показана возможность выявления индуктируемых вирусом лейкоза антител в сыворотке крови и сыворотке молока больных животных с помощью иммуносенсора на основе ППР. Доказано, что анализ является чувствительнее, чем традиционный метод РИД. Минимальным разведением сывороток молока при экспрессном определении специфических антител в молоке с помощью ППР следует считать 1:20.

Следует добавить, что общее время анализа иммунным сенсором составляет  лишь 40 минут, включая время на иммобилизацию антигена на поверхности преобразователя, блокирования свободных мест связывания и промывания измерительной ячейки. Сама же процедура тестирования сывороток не превышает 10 минут.

Пирогова Л.В, Стародуб М.Ф. Артюх В.П., Нагаэва Л.І., Добросол Г.І. Експресна діагностика лейкозу великої рогатої худоби за допомогою імунного сенсора на основі поверхневого плазмонного резонансу. Укр. біохім. журн. т. 74. No 3. С. 88 –92. 2002

Стародуб М.Ф., Пирогова Л.В. Спосіб неінвазійної діагностики лейкозу великої рогатої худоби шляхом визначення антитіл до вірусу у молоці корів імуносенсором поверхневого плазмонного резонансу. Петент України на винахід, No12689/3730, Бюл. від 23.11.2007.

Іммобілізація антигену ретровірусу лейкозу великої рогатої худоби на поверхні імунного біосенсора / Л. В. Пирогова, М. Ф. Стародуб // Біотехнологія. — 2008. — Т. 1, № 2. — С. 52-58.

 

Диагностика вирусного лейкоза крупного рогатого скота: 6 комментариев

  • Уведомление: generic levitra

  • Уведомление: buy cialis

  • Уведомление: walmart cialis

  • Уведомление: viagra online canada pharmacy

  • Уведомление: tadalafil 20mg

  • Уведомление: natural viagra

  • Комментарии запрещены.